目前用于紡織退漿的淀粉酶主要ELISA試劑盒，淀粉糖化酶（β-淀粉酶），胰淀粉酶，麥芽淀粉酶等。我國(guó)主要采用耐熱性強(qiáng)的枯草桿菌淀粉酶即α-淀粉酶（枯草桿菌），β淀粉酶屬于一種細(xì)菌淀粉酶是由地衣芽孢桿菌經(jīng)液體深層發(fā)酵，提取等工序精制而成的淺褐色液體生物制劑，廣泛應(yīng)用于啤酒等生產(chǎn)中。它對(duì)溫度有較強(qiáng)的適應(yīng)能力。它并非為單一為單一淀粉酶，還含有其它酶組分。后者含量較少，但它們的存在有利于去除織物上的油脂，蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。

 

    實(shí)驗(yàn)顯示，ELISA試劑盒經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，人正常肝細(xì)胞這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，人白介素ELISA試劑盒而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

 

    ELISA試劑盒于動(dòng)物（唾液、胰臟等）、植物（麥芽、山萮菜）及微生物。微生物的酶幾乎都是分泌性的。此酶以Ca2+為必需因子并作為穩(wěn)定因子和激活因子，也有部分淀粉酶為非Ca2+依賴型。淀粉酶既作用于直鏈淀粉，亦作用于支鏈淀粉，無差別地隨機(jī)切斷糖鏈內(nèi)部的α－1，4-鏈。因此，其特征是引起底物溶液粘度的急劇下降和碘反應(yīng)的消失，zui終產(chǎn)物在分解直鏈淀粉時(shí)以葡萄糖為主，此外，還有少量麥芽三糖及麥芽糖，其中真菌a-淀粉酶水解淀粉的終產(chǎn)物主要以麥芽糖為主且不含大分子極限糊精，在烘焙業(yè)和麥芽糖制造業(yè)具有廣泛的應(yīng)用。另一方面在分解支鏈淀粉時(shí)，除麥芽糖、葡萄糖、麥芽三糖外，還生成分支部分具有α-1，6-鍵的α-極限糊精（又稱α-糊精）。一般分解限度以葡萄糖為準(zhǔn)是35-50%，但在細(xì)菌的淀粉酶中，亦有呈現(xiàn)高達(dá)70%分解限度的（zui終游離出葡萄糖）；

 

    一、選擇試劑

 

    選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

 

    二、加樣

 

    大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒可能原因：

 

    1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；

 

    2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）；

 

    3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

 

    大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒解決辦法：

 

    1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

 

    2） 加樣后及時(shí)放入孵箱。

 

    3） 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

 

    4） 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

 

    5） 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。

 

    常見ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)，不看就沒了！

 

    我公司技術(shù)專員對(duì)解析出其實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)，下面一起來看看吧。

 

    1. 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等；

 

    2. 根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量；

 

    3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑；

 

    4. 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。

 

    實(shí)驗(yàn)中為了確定*佳信號(hào)和*背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。

 

    標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

 

    一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

 

    為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。