培養液pH值變化太快 

可能原因

建議解決方法

1.CO2張力不對

按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5%到10%。

2.培養瓶蓋擰得太緊

松開瓶蓋1/4圈。

3.NaHCO3緩沖系統緩沖力不足

改用不依賴CO2培養液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃。

4.培養液中鹽濃度不正確

在CO2培養環境中改用基于Earle′s鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks人人大細胞肺癌細胞NCI-H460性能參數說明書鹽配制的培養液。

5.細菌、酵母或真菌污染

丟棄培養物，或用抗生素除菌。

 培養細胞死亡 

可能原因

建議解決方法

1. 培養箱內無CO2

檢測培養箱內CO2

2. 培養箱內溫度波動太大

檢查培養箱內溫度

3. 細胞凍存或復蘇過程中損傷

取新的保存細胞種

4. 培養液滲透壓不正確

檢測培養液滲透壓。注意：大多數哺乳動物細胞能耐人肝癌細胞，人大細胞肺癌細胞NCI-H460性能參數說明書受滲透壓為260– 350   mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養液滲透壓。

5. 培養液種有毒代謝產物堆積

換入新鮮培養液